乳酸脫氫酶(LDH)測試盒

商品詳情：
測定意義：

LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化酸與乳酸之間的可逆反應(yīng)，伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成酸，酸進(jìn)一步與2, 4 - 二肼作用生成酸二腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與酸濃度成正比。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣品中AA提?。?/span>

1.按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行室溫勻漿，然后轉(zhuǎn)移到1.5 mL EP 管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15 min；自來水冷卻后，8000g，，4℃離心10min，上清液置冰上待測。

2.細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

3.血清等液體：直接檢測。

計算公式如下：

1、血清（漿）LAP活力的計算:

單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘生成1 nmol的對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min/mL）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=205.8×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中LAP活力的計算:

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W× V樣÷V樣總) ÷T=205.8×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：

單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1 nmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

LAP（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(2000×V樣÷V樣總) ÷T=0.103×ΔA

V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.05 mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，2 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；2000：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，2000萬。

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T4 RNA Ligase規(guī)格：1000 units

Endonuclease V, T.maritima規(guī)格：250 units

Micrococcal Nuclease規(guī)格：8000 units

Exonuclease III規(guī)格：4000 units

分枝桿菌DNAout

土壤DNAout

細(xì)菌DNAout（250次）

細(xì)菌DNAout（50次）

一步式細(xì)菌DNAout

柱式分枝桿菌DNAout

柱式水樣DNAout

柱式土壤DNAout

柱式微生物基因組DNAout

柱式細(xì)菌DNAout（50次）

病毒DNA提取

96孔板病毒DNAout(離心法)（1次）

96孔板病毒DNAout(離心法)（5次）

96孔板病毒DNAout(真空法)（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

M13噬菌體單鏈基因組DNAout（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

λ噬菌體DNAout（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

一管式病毒DNA-RNAout

一管式病毒DNAout（200次）

一管式病毒DNAout（50次）

柱式病毒DNAout

經(jīng)典法質(zhì)粒DNA提取

96孔板質(zhì)粒DNAout(離心法)

Exonuclease I規(guī)格：4000 units

Exonuclease I規(guī)格：20000 units

Endonuclease IV, E.coli規(guī)格：100 units

RNase I規(guī)格：1000 units

RNase I規(guī)格：5000 units

注意事項：

1. 試劑盒中試劑三、試劑四和標(biāo)準(zhǔn)品均需臨用前配制，且避光保存，配制好未使用完的4℃保存且3天內(nèi)使用完畢。

2. 為保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個樣做預(yù)實驗，如果測定的吸光值過高（高于2.5），用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰，因此，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4．檢出限為100μmol/L。