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乳癌細胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)基膠原酶的消化法實驗步驟

此法曾用于乳癌細胞的培養(yǎng)，具體程序是：

　?。?）先是用0.5%胰蛋白酶和0.02％EDTA（1：1）混合液漂洗培養(yǎng)基細胞一次，然后再換成新的混合液繼續(xù)消化，并在倒置顯微鏡下窺視和不時搖動培養(yǎng)瓶，到半數(shù)細胞脫落下來后，便立即停止消化；

　　（2）把消化液吸入離心管中，離心去上清，吸入另瓶中，加培養(yǎng)液置溫箱中培養(yǎng)；向原瓶內(nèi)也補加新的培養(yǎng)基液繼續(xù)培養(yǎng)。用此法處理后，成纖維細胞比腫瘤細胞易先脫落。經(jīng)過幾次反復處理，可能把成纖維細胞除凈。

本法是利用成纖維細胞對膠原酶較為敏感的特點，通過消化進行選擇。

　?。?）可用0.5mg/ml的膠原酶消化處理，邊消化邊在倒置顯微鏡下窺視，當發(fā)現(xiàn)成纖維細胞被除掉后，即終止消化；

　?。?）用Hanks洗滌處理一次后，更換新培養(yǎng)基液，繼續(xù)培養(yǎng)，可獲純凈腫瘤細胞。如成纖維細胞未被除凈，可再次重復。